如何形成厌氧培养箱操作室的环境

厌氧培养箱是一种可在无氧环境下进行**培养及操作的专用装置，可培养*难生长的厌氧生物在大气中操作时接触氧而死亡的危险性。

　　1. 厌氧培养箱应安放在温差较小、操作方便的位置，应避免阳光直晒和远离采暖设备，放置平稳;

　　2. 将混合气瓶、氮气瓶安放平稳，并分别装好减压阀(含压力表)，安置在适当位置;

　　3. 接上气路并检查气路，为防止漏气，必要时可在各接管处用密封胶粘合;

　　一、皓庄厌氧培养箱操作室厌氧环境形成：

　　1. 按使用要求放置好必要的附件和器具，并向操作室内放入二个无毒塑料袋;

　　2. 通电源开照明灯，开温控仪，调节所需温度及**温度;

　　3. 操作室内放入1000g钯粒(封闭)和500g干燥剂，并放入美兰指示剂(封闭);

　　4. 关紧取样室内外门，并抽真空校验;

　　5. 操作室内**次置换(氮气置换)：

　　A. 先用橡皮管插入操作室内进气口，另一头插入塑料袋;

　　B. 接通氮气进气路，打开氮气控制阀1，使二只塑料袋充足氮气，关闭阀门1，然后扎紧袋口;

　　C. 把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧;

　　D. 把塑料袋内氮气渐渐放于操作室内，至全部放出。

　　6. 操作室**次置换(氮气置换)重复一次充氮过程，取样室先抽真空，并注意随时用脚踏开关开闭排气。

　　7. 操作室第三次置换(混合气体置换)：(混合气体配比为N2 85%、H2 10%、CO2 5%)

　　A. 调换气路打开混合气阀3进气，充气时取样室先抽真空，并随时用脚踏开关开闭排气;

　　B. 混合气充满塑料袋后，关掉混合气阀并打开阀5，使混合气经过流量计，调整流量计，流量为每分钟10ml左右;

　　C. 把塑料袋内混合气渐渐排于操作室内;

　　D. 通过三次换气后，操作室内气体含氧量已处于极微量状态。

　　8. 操作室内打开粑粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，一小时后开美兰指示剂(美兰安瓶)观察其变**况，不变色为操作室内达到厌氧环境;

　　9. 开紫外线**灯，室内进行**处理，**时间按具体实验自定。

　　2、菌种的置入和培养：

　　1. 检查取样室内门并关紧之;

　　2. 打开取样室外门，将菌种放入取样室后即关上外门;

　　3. 取样室充氮置换三次过程：打开真空泵，先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后人工打开氮气阀2进气，使指针回复零位，关掉阀2。**次重复操作一次。第三次操作时，使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后打开阀4进混合气，使指针回复零位，后掉阀4。取样室充氮置换三次过程结束;

　　4. 如选定真空度较低就需要增加置换的次数;

　　5. 取样室内外门开启、关紧，再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)检验;

　　6. 厌氧培养箱需要长期连续使用的条件：

　　A. 每天在操作室内打开美兰指示剂观察，如不正常就必须重新换气;

　　B. 要长期连续输入微量的混合气体，使补进的氮气能和微量的氧结合通过催化吸收，保证室内厌氧状态，补入混合气流量选定为每分钟10ml左右;

　　C. 连续培养运行**，更换一次除氧剂和干燥剂。

　　7. 操作室内培养室内室温度可任意选择和控制。

　　8. 混合气瓶、氮气瓶输出压力调整：调节减压阀，使输出压力0.1Mpa左右。

　　注意事项

　　1. 仪器尽可能地安装于空气清净、温度变化较小的地方;

　　2. 开机前应**熟悉和了解各组成配套仪器、仪表的使用说明，掌握正确使用方法;

　　3. 培养物放入必须是在操作室内达到**厌氧环境后放入;

　　4. 如发生故障(停气等原因)操作室内仍可保持12小时厌氧状态(超过12小时则根据需要把培养物取出另作处理);

　　5. 经常注意气路有无漏气现象;

　　6. 调换气瓶时，注意要扎紧气管，避免流入含氧气体;

　　7. 真空泵按要求使用，定期检查加油。